Le contrôle qualité évolue : l'USP <86> pourrait bien révolutionner la détection des endotoxines

Les endotoxines, composants de la paroi cellulaire des bactéries Gram négatif, représentent un risque important pour la sécurité des patients. Les endotoxines pouvant provoquer de graves réactions inflammatoires, notamment de la fièvre, un choc septique, voire la mort, leur teneur doit être rigoureusement testée et contrôlée dans les produits injectables et les dispositifs médicaux, ainsi que dans les matières premières de l'eau pour préparations injectables et les conteneurs primaires utilisés pour la production. Elles sont très stables et résistantes à la chaleur et sont difficilement éliminées par filtration. La seule stratégie efficace est la prévention et le contrôle grâce à des méthodes précises au cours du processus de fabrication et avant la libération du produit.

Il ressort des études de marché que 70 à 100 millions de tests de détection des endotoxines sont effectués chaque année : avec un tel volume, il convient également de prendre en considération l'impact environnemental et le facteur « développement durable » de ces tests. Traditionnellement, les tests de détection des endotoxines étaient réalisés à l'aide de réactif LAL, extrait de limules. Cependant, l'industrie pharmaceutique se trouve confrontée à un enjeu important : « Pouvons-nous continuer à nous appuyer sur un système reposant sur les animaux pour notre chaîne logistique alors que les limules sont en voie de disparition, que le nombre annuel de tests augmente rapidement et que la science a évolué grâce aux technologies de l'ADN recombinant ? » C'est ainsi que sont nées les méthodes de tests de détection des endotoxines recombinants. Alors que la majorité des tests de détection des endotoxines font encore appel à des méthodes traditionnelles, l'apparition de nouveaux réactifs recombinants offre l'occasion d'évaluer les avantages d'un changement potentiel. Les fabricants qui évaluent leur approche actuelle des tests de détection des endotoxines et envisagent de passer à des méthodes de test modernes peuvent souhaiter réfléchir aux facteurs essentiels suivants :

1. Fiabilité

Les agents rFC sont produits de manière à ne contenir que le composant spécifique du LAL qui est activé par la présence d'endotoxines, ce qui augmente l'homogénéité entre les lots par rapport aux sources animales. Dans le domaine de la fiabilité, les agents recombinants offrent également une source de production plus stable que le LAL puisqu'ils peuvent être produits en fonction des besoins et que les fabricants ne sont pas tributaires de leur disponibilité saisonnière. 

2. Considérations éthiques

La dépendance de l'industrie pharmaceutique à l'égard du LAL pour les tests de détection des endotoxines pose des problèmes éthiques aux fabricants car le LAL est issu du sang de limules vivant à l'état sauvage. S'il est vrai que la fabrication et les tests de produits stériles ont toujours fait appel aux animaux, ces pratiques sont en déclin depuis un certain temps et des principes comme les 3R ont amené les sociétés à chercher à remplacer, réduire et affiner leur recours aux animaux. Dans le cas des tests de détection des endotoxines, le passage du LAL aux agents recombinants pourrait permettre de se passer de 90 000 animaux par an,¹ ce qui constitue un autre argument de poids en faveur de l'abandon des méthodes traditionnelles.

3. Efficacité

Les tests de détection des endotoxines effectués à l'aide de réactifs recombinants présentent un autre avantage considérable : ils sont plus efficaces. Les tests LAL traditionnels nécessitent souvent de nombreuses étapes : pipetage multiple, création de courbes, reconstitution quotidienne du lysat et perte due au gaspillage du lysat… Lors de l'utilisation d'un test rFC, 21 résultats peuvent être obtenus en 30 minutes avec une sensibilité de 0,05 EU/ml ou en 1 heure avec une sensibilité de 0,005 EU/ml. L'utilisation de plaques pré-enduites supprime les étapes les plus longues et les plus susceptibles d'entraîner des erreurs, tout en préservant la sensibilité et la conformité exigées dans le cadre du contrôle qualité pharmaceutique.

Cette approche permet également d'optimiser les opérations de laboratoire en réduisant la charge de travail de l'opérateur, grâce à une diminution du temps de formation et du nombre d'étapes manuelles et à un minimum de recherche de pannes ; elle libère ainsi la capacité des techniciens et permet de maîtriser les coûts de main-d'œuvre. Des performances constantes pour tous les utilisateurs et toutes les équipes réduisent le risque de résultats erronés, minimisant ainsi le nombre de tests à recommencer et les perturbations dans la planification quotidienne du laboratoire. Les tests effectués à l'aide de réactifs rFC permettent également d'intégrer facilement des processus automatisés, ce qui peut aboutir à des gains d'efficacité supplémentaires et à une réduction du risque d'erreur humaine.